Περιεχόμενο
- TL · DR (Πολύ μακρύ;
- Τι είναι η ηλεκτροφόρηση;
- Μη ικανοποιητική προετοιμασία πηκτώματος
- Πάρα πολύ δείγμα
- Δείγμα κακής ποιότητας
Έχετε αναρωτηθεί ποτέ πώς οι επιστήμονες μελετούν μικροσκοπικά θραύσματα όπως το DNA σας; Μία μέθοδος είναι ηλεκτροφόρηση πηκτής. Ενώ η ηλεκτροφόρηση συνήθως παράγει σαφείς και ευανάγνωστες ζώνες τέλειες για επιστημονική ερμηνεία, τα θρυμματισμένα αποτελέσματα μερικές φορές αποκρύπτουν τα δεδομένα.
TL · DR (Πολύ μακρύ;
Η ηλεκτροφόρηση πηκτής επιτρέπει στους επιστήμονες να απεικονίζουν δείγματα που έχουν υποστεί πέψη και να μετρήσουν τα μεγέθη των θραυσμάτων. Απομιμήσεις αποτελεσμάτων από ακατάλληλα παρασκευασμένα πηκτώματα αγαρόζης, φόρτωση ενός μη αραιωμένου δείγματος στα φρεάτια ή χρησιμοποιώντας δείγματα χαμηλής ποιότητας.
Τι είναι η ηλεκτροφόρηση;
Η ηλεκτροφόρηση του πηκτώματος είναι ένας τρόπος για τους επιστήμονες να απεικονίζουν τα αφομοιωμένα δείγματα μικρών μορίων όπως το DNA και να εκτιμήσουν τα μεγέθη αυτών των θραυσμάτων. Για να πραγματοποιηθεί ηλεκτροφόρηση, οι επιστήμονες προετοιμάζουν ένα πήκτωμα με αιώρηση της αγαρόζης σε βραστό νερό. Ο προκύπτων πολυμερισμός παράγει διασπασμένα πολυμερή ζάχαρης έτσι ώστε το πήκτωμα να μοιάζει κάπως με ένα ιστό αράχνης στο χημικό επίπεδο.
Οι επιστήμονες χρησιμοποιούν ένα εργαλείο κοπής για να σχηματίσουν φρεάτια στο πήκτωμα, ώστε να μπορούν να φορτώσουν πολύ μικρές ποσότητες δειγμάτων που έχουν υποστεί πέψη στα πηγάδια. Όταν ενεργοποιείτε το μηχάνημα, το ηλεκτρικό ρεύμα διαρρέει μέσω της γέλης και τα θραύσματα των δειγμάτων αρχίζουν να κινούνται από τα πηγάδια στην άλλη πλευρά του πηκτώματος. Επειδή το πήκτωμα είναι ιστό, μικρότερα θραύσματα κινούνται γρήγορα μέσω της μήτρας, ενώ μεγαλύτερα θραύσματα χρειάζονται περισσότερο χρόνο για να αναρριχηθούν μέσω της μήτρας. Όταν τελειώσει, το πήκτωμα περιέχει σκοτεινές ζώνες που αντιπροσωπεύουν πόσο μακριά ταξίδευαν τα διαφορετικά κομμάτια. Οι επιστήμονες μετρούν αυτές τις ζώνες και χρησιμοποιούν ένα λογαριθμικό υπολογισμό για να καθορίσουν το μέγεθος κάθε θραύσματος με βάση το πόσο μακριά μετανάστευσαν.
Οι επιστήμονες ελπίζουν για σαφείς ζώνες, αλλά μερικές φορές οι ταινίες επίχρισμα. Αυτή η επάλειψη είναι συνήθως αποτέλεσμα κακής προετοιμασίας πηκτωμάτων, φορτώνοντας μη αραιωμένα δείγματα στα φρεάτια ή δείγματα κακής ποιότητας.
Μη ικανοποιητική προετοιμασία πηκτώματος
Όταν πρόκειται για τα αποτελέσματα, ένας πιθανός ένοχος είναι μια κακώς παρασκευασμένη γέλη. Ένα ικανοποιητικό πήκτωμα πολυμερίζεται ομοιόμορφα, παράγοντας μια ομοιόμορφη μήτρα σε όλη τη γέλη στο δίσκο χύτευσης. Εάν ένα μέρος του πηκτώματος - συνήθως το κατώτερο μισό - τεθεί πριν ο επιστήμονας τερματίσει να ρίξει ολόκληρο το δίσκο, το προκύπτον πήκτωμα θα είναι ανομοιογενές και θα αποφέρει μολυσμένα αποτελέσματα.
Πάρα πολύ δείγμα
Πριν από τη φόρτωση των δειγμάτων στα φρεάτια, τα δείγματα αυτά πρέπει να αραιώνονται αρκετά ώστε να διέλθουν από το πήκτωμα χωρίς να ξεχειλίζουν τα φρεάτια. Εάν ένα φορτωμένο δείγμα είναι πολύ συγκεντρωμένο επειδή ο επιστήμονας ξέχασαν να το αραιώσουν ή χρησιμοποιούσαν έναν ακατάλληλο παράγοντα αραίωσης, τα θραύσματα θα είναι πολύ μεγάλα για τα πηγάδια και θα δημιουργούσαν λεκέδες.
Δείγμα κακής ποιότητας
Η έκχυση είναι επίσης αποτέλεσμα κακής ποιότητας δείγματος. Για παράδειγμα, ένα δείγμα ϋΝΑ που έχει μολυνθεί με πρωτεΐνη ή περιέχει υπερβολικά μεγάλο άλας μπορεί να προκαλέσει επάλειψη. Τα υποβαθμισμένα ή μετουσιωμένα δείγματα αποδίδουν επίσης και φτωχά αποτελέσματα, συμπεριλαμβανομένων των λωρίδων που έχουν υποστεί βλάβη.
Η ηλεκτροφόρηση του πηκτώματος είναι ένας καταπληκτικός τρόπος για τους επιστήμονες να απεικονίζουν δείγματα που έχουν υποστεί πέψη και να καθορίσουν το μέγεθος των θραυσμάτων. Η προσεκτική προετοιμασία τόσο της γέλης όσο και του δείγματος ελαχιστοποιεί την πιθανότητα στίλβωσης και δίνει σαφείς ζώνες ιδανικές για επιστημονική ερμηνεία.