Περιεχόμενο
Αν και δεν μπορούν να παρατηρηθούν με γυμνό μάτι, τα βακτήρια είναι παντού. Υπάρχουν σε τρόφιμα, χώμα, νερό, επιφάνειες μέσα στα σπίτια μας και μέσα και πάνω στο σώμα μας. Τα βακτήρια γενικά υπάρχουν σε μικτούς πληθυσμούς. Η απομόνωση συγκεκριμένου βακτηριδίου από άλλα βακτηριακά είδη σε ένα δεδομένο δείγμα επιτρέπει σε μικροβιολόγους να μελετήσουν τη δομή και τη λειτουργία τους, τα χαρακτηριστικά που χρησιμοποιούνται για την αναγνώρισή τους. Οι μικροβιολόγοι συχνά απομονώνουν τα βακτηρίδια χρησιμοποιώντας μία από τις διάφορες τεχνικές πλάκας ραβδώσεων.
Εργαλεία
Για την μεταφορά μικροοργανισμών χρησιμοποιείται ένας βρόχος εμβολιασμού. Αποτελείται από ένα νικέλιο ή λευκόχρυσο σύρμα με ένα μικρό, κυκλικό βρόχο στο ένα άκρο. Το άλλο άκρο είναι ευθεία και ολισθαίνει σε λαβή. Υπάρχουν επίσης πλαστικοί βρόχοι εμβολιασμού μίας χρήσης. Τα βακτήρια μπορούν να απομονωθούν μόνο αν αναπτυχθούν. Οι μικροβιολόγοι αναπτύσσουν βακτήρια για απομόνωση πλάκας ραβδώσεων σε ρηχά, στρογγυλά πιάτα Petri γεμάτα με ένα στερεό μέσο, που ονομάζεται άγαρ. Το άγαρ μιμείται το περιβάλλον στο οποίο αναπτύσσονται τα βακτήρια. Τα πιάτα που είναι γεμάτα με μέταλλα είναι αποστειρωμένα και λυγισμένα για να αποτρέψουν την ανάπτυξη ανεπιθύμητων οργανισμών. Κατά τη διάρκεια απομόνωσης πλάκας ραβδώσεων, ο βρόχος εμβολιασμού επανειλημμένα αποστειρώνεται στη φλόγα ενός καυστήρα Bunsen.
Αρχή
Η τεχνική πλάκας ράβδων είναι η πιο δημοφιλής μέθοδος για την απομόνωση συγκεκριμένων βακτηρίων από ένα δείγμα που περιέχει ένα μείγμα μικροοργανισμών. Η τεχνική ουσιαστικά αραιώνει τον αριθμό των οργανισμών και μειώνει την πυκνότητα τους. Επιτρέπει στους μικροβιολόγους να διακρίνουν και να απομονώσουν μεμονωμένες βακτηριακές αποικίες. Μια αποικία είναι ένα ορατό σύμπλεγμα βακτηρίων. Όλα τα βακτήρια σε μία μόνο αποικία προέρχονται από το ίδιο βακτηριακό κύτταρο. Κατά συνέπεια, μεμονωμένες αποικίες είναι "καθαρές" αποικίες. Η καθαρή αποικία μεταφέρεται σε άλλη πλάκα για να παραχθεί μια καθαρή καλλιέργεια αποτελούμενη από έναν τύπο βακτηρίων.
Διαδικασία
Όταν γίνεται σωστά, η απομόνωση των πλακών απομακρύνει ένα δείγμα και επιτρέπει στα μεμονωμένα βακτηριακά κύτταρα να αναπτυχθούν σε απομονωμένες αποικίες. Ένας μικροβιολόγος αρχίζει με αποστείρωση του εμβολιαστικού βρόχου σε μια φλόγα. Ψύχει τον βρόχο αγγίζοντας το στο άγαρ, στη συνέχεια βυθίζει το βρόχο στο δείγμα και το απλώνει προς τα εμπρός και προς τα πίσω για να καλύψει ένα τμήμα της πλάκας. Αποστειρώνει τον βρόχο, τον ψύχει και ενοφθαλμίζει ένα δεύτερο γειτονικό τμήμα της πλάκας, σύροντας τον βρόχο μέσω του πρώτου τμήματος αρκετές φορές και καλύπτοντας το δεύτερο τμήμα χρησιμοποιώντας μια κίνηση ζιγκ-ζαγκ. Αυτό συλλέγει ένα μικρό αριθμό βακτηρίων από το πρώτο τμήμα και τα μεταφέρει στο δεύτερο τμήμα. Ο αριθμός των επαναλήψεων αυτής της βασικής διαδικασίας εξαρτάται από τη χρησιμοποιούμενη μέθοδο πλάκας ράβδων. Παρά τη μέθοδο, το αρχικό δείγμα χρησιμοποιείται μόνο για τον εμβολιασμό του πρώτου τμήματος της πλάκας.
Μέθοδος πλάκας ράβδων
Οι μέθοδοι πλάκας ράβδων ποικίλλουν ανάλογα με τον αριθμό των τμημάτων των τμημάτων άγαρ. Η μέθοδος T-Streak χρησιμοποιεί τρία τμήματα: το άνω μισό και δύο τμήματα πυθμένα ίσου μεγέθους. Το αρχικό εμβόλιο τοποθετείται στο άνω μισό της πλάκας. Τα βακτήρια τραβιούνται από το άνω τμήμα σε ένα από τα κάτω τμήματα, στη συνέχεια από εκείνο το τμήμα κάτω προς το άλλο. Στη μέθοδο τεταρτημόριο, τέσσερα τμήματα ίσου μεγέθους είναι ραβδωμένα. Η μέθοδος συνεχούς ράβδου τυπικά περιλαμβάνει τον εμβολιασμό του άνω ημίσεως της πλάκας, την περιστροφή της κατά 180 μοίρες και τον εμβολιασμό του άλλου μισού της πλάκας χωρίς αποστείρωση του βρόχου ή των βακτηρίων που έρχονται από το προηγούμενο τμήμα.