Περιεχόμενο
Η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης είναι μια τεχνική για την εργαστηριακή ανάλυση ενός μείγματος. Είναι ένας αποτελεσματικός τύπος χρωματογραφίας που χρησιμοποιεί υψηλή πίεση, και όχι απλώς βαρύτητα, για να προωθεί ένα δείγμα μίγματος μέσω μιας στήλης. Εγχύεται ένα δείγμα και στη συνέχεια μια αντλία που περιέχει μεγάλες ποσότητες πίεσης βοηθά στη μετακίνηση του δείγματος κατά μήκος μιας γεμάτης στήλης, όπου χωρίζεται σε μεμονωμένα εξαρτήματα. Αυτός ο διαχωρισμός κατόπιν αναλύεται με ανιχνευτή για να αποδώσει αποτελέσματα.
Ιστοσελίδα έγχυσης
Για να εγχυθεί σε HPLC, ένα δείγμα πρέπει πρώτα να διαλυθεί σε ένα πολικό υγρό διαλύτη, κατά προτίμηση ένα με γνωστά φάσματα HPLC, έτσι ώστε τα δεδομένα του να μπορούν να διακριθούν από τα δείγματα. Το υγρό διάλυμα που περιέχει το δείγμα τοποθετείται στο όργανο και αποστέλλεται στη στήλη. Η πραγματική θέση του χώρου της ένεσης εξαρτάται από τη μάρκα των οργάνων. Στις περισσότερες περιπτώσεις, η διαδικασία της ένεσης είναι αυτοματοποιημένη, αλλά σε ορισμένες περιπτώσεις ένας εργαστηριακός εργαζόμενος πρέπει να εγχέει το δείγμα χρησιμοποιώντας μια μικρή βελόνα σύριγγας.
Αντλία αντλίας
Το στοιχείο της αντλίας της μονάδας HPLC είναι απαραίτητο επειδή παρέχει την πίεση που προωθεί το δείγμα μέσω της στήλης. Η ισχύς της αντλίας ποικίλλει, αλλά μια ισχυρή μπορεί να παράγει μια πίεση μέχρι 6.000 psi ή λίρες ανά τετραγωνική ίντσα, η οποία εφαρμόζεται μετά την ένεση του δείγματος. Αυτό επιτρέπει στο δείγμα να περάσει μέσα από τη στήλη πιο γρήγορα και αποτελεσματικά απ 'ό, τι εάν επρόκειτο να στάξει με τη χρήση μόνο της βαρύτητας.
Περιγραφή στήλης
Η αυξημένη ταχύτητα ενός δείγματος που διέρχεται από τη στήλη από μια αντλία επιτρέπει τη χρήση διαφορετικού τύπου στήλης από αυτές που χρησιμοποιούνται σε απλή υγρή χρωματογραφία. Το υλικό συσκευασίας στη στήλη μπορεί να έχει πολύ μικρότερο μέγεθος σωματιδίων, το οποίο αυξάνει την επιφάνεια και συνεπώς βοηθάει τις αλληλεπιδράσεις του δείγματος με τη στήλη. Οι περισσότερες στήλες HPLC δουλεύουν μέσω της πολικότητας. Το δείγμα διαλύεται σε πολικό διαλύτη και η στήλη αποτελείται από μη πολικούς υδρογονάνθρακες. Τα πολικά τμήματα του μορίου του δείγματος διέρχονται πολύ γρήγορα από τη στήλη επειδή αλληλεπιδρούν κυρίως με τον διαλύτη, ενώ τα δείγματα μη πολικών συστατικών παραμένουν στη στήλη, σχηματίζοντας ασθενείς αλληλεπιδράσεις με τα συστατικά της στήλης. Επομένως, τα συστατικά των δειγμάτων βγαίνουν από τη στήλη κατά σειρά από τα πιο πολικά έως τα πιο μη πολικά.
Λειτουργία ανιχνευτή
Οι ανιχνευτές επίσης διαφέρουν ανάλογα με τον τύπο του χρησιμοποιούμενου οργάνου HPLC. Ωστόσο, οι περισσότεροι λειτουργούν με τον ίδιο βασικό τρόπο. Μια πηγή υπεριώδους φωτός λάμπει στα διαχωρισμένα συστατικά του δείγματος καθώς βγαίνουν από τη στήλη. Οι περισσότερες οργανικές ενώσεις απορροφούν μια ορισμένη ποσότητα φωτός, έτσι ώστε όταν περνούν από την εφαρμοζόμενη δέσμη φωτός, ένας ανιχνευτής μπορεί να πάρει πόση φως απορροφάται. Ο ανιχνευτής καταγράφει επίσης το χρόνο συγκράτησης των εξαρτημάτων βάσει της σειράς κατά την οποία βγαίνουν από τη στήλη. Αυτή η έξοδος μπορεί στη συνέχεια να αναλυθεί βάσει της περιοχής κορυφής για να προσδιοριστεί η ακριβής φύση των συστατικών των δειγμάτων.