Περιεχόμενο
Υγρός θρεπτικός ζωμός χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια βακτηρίων όπως Escherichia coli. Οι συνταγές για αυτόν τον ζωμό ποικίλουν ανάλογα με τα βακτηριακά είδη και την παρουσία γενετικών τροποποιήσεων, π.χ. αντοχή στα αντιβιοτικά. Ο ζωμός μπορεί να στερεοποιηθεί με προσθήκη άγαρ, που επιτρέπει στα βακτήρια να σχηματίσουν ξεχωριστές αποικίες, ενώ σε υγρή καλλιέργεια απλώς διασκορπίζονται σε όλο τον όγκο. Πρόκειται για μια βασική αλλά ουσιαστική τεχνική για προηγμένες μεθόδους όπως γονιδιακή κλωνοποίηση ή μικροβιολογικές δοκιμασίες. Αυτό το άρθρο υποθέτει ότι τα πρότυπα εργαστηριακά στελέχη Escherichia coli πρόκειται να καλλιεργηθούν σε πλάκες άγαρ ζωμού Luria (LB) (ή τρυβλία Petri).
Ζυγίζονται 10 γραμμάρια τρυπτόνης βακτηριακής ποιότητας, 5 γραμμάρια εκχυλίσματος ζύμης, 5 γραμμάρια χλωριούχου νατρίου, 15 γραμμάρια άγαρ ή αγαρόζης και 1 χιλιοστόλιτρο υδροξειδίου του νατρίου 1 Ν. Αναμιγνύουμε αυτά με έναν όγκο αποσταγμένου και αποστειρωμένου με αυτόκλειστο νερό μέχρι να ληφθεί 1 λίτρο μέσου. Autoclave τα μέσα σε χαλαρά καλυμμένα μπουκάλια ή φιάλες για 25 λεπτά. Αφήστε να κρυώσει σε περίπου 50 βαθμούς Κελσίου πριν προσθέσετε αντιδραστήρια που θα καταστραφούν σε υψηλή θερμοκρασία, όπως τα αντιβιοτικά ή άλλα συμπληρώματα διατροφής.
Αφήστε το μέσο σε αυτόκλειστο να κρυώσει στους 50 βαθμούς Κελσίου και όχι κάτω από τους 45 βαθμούς Κελσίου, καθώς το άγαρ θα τοποθετηθεί στο δοχείο του πριν να χυθεί. Αποκτήστε στείρα πιάτα Petri και ρίξτε αρκετά για να καλύψετε ολόκληρη την επιφάνεια της πλάκας και τουλάχιστον το μισό του βάθους. Αποφύγετε την υπερπλήρωση των πλακών και κατά προτίμηση μην αφήνετε το άγαρ να έρχεται σε επαφή με την άνω άκρη του δίσκου. Αφήστε τα πλακίδια να στερεοποιηθούν σε ένα αποστειρωμένο περιβάλλον (π.χ. κάτω από μια κουκούλα με στρωμνή ροή) αφήνοντας τα καπάκια μακριά και σε μια γωνία της κουκούλας.
Στεγνώστε τις πλάκες. Αν και οι πλάκες μπορούν να χρησιμοποιηθούν μόλις τεθούν, θα υπάρχει κάποια υγρασία στην επιφάνεια του άγαρ, πράγμα που θα αποτρέψει την επαρκή πρόσφυση των βακτηριακών αποικιών. Ως εκ τούτου, είναι καλύτερο να στεγνώσουν οι πλάκες πριν από την εφαρμογή οποιωνδήποτε βακτηρίων, για παράδειγμα αφήνοντας τους να καθίσουν σε θερμοκρασία δωματίου για λίγες ημέρες ή για μισή ώρα κάτω από μια κουκούλα με στρωμνή ροή ή σε έναν επωαστήρα 37 βαθμών Κελσίου.
Αποθηκεύστε τις πλάκες. Οι αποξηραμένες πλάκες πρέπει να στοιβάζονται ανάποδα (ανεστραμμένη) στα καπάκια τους και να επιστρέφονται στην αρχική τους συσκευασία, να κλείνουν με ταινία και να είναι τυλιγμένες σε φύλλα για προστασία από το φως ή σε κατάλληλο δοχείο. Να γράφετε πάντοτε την ημερομηνία παρασκευής στα πιάτα και να αποφεύγετε τη χρήση εάν οι πλάκες έχουν ηλικία μεγαλύτερη των 2 μηνών.