Οι χημικοί χρησιμοποιούν υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης ή HPLC για να διαχωρίσουν τα μίγματα των ενώσεων. Γενικά, η μέθοδος συνίσταται στην έγχυση ενός δείγματος σε μια στήλη όπου αναμιγνύεται με έναν ή περισσότερους διαλύτες. Διάφορες ενώσεις προσροφούν ή "κολλήσουν" στη στήλη σε διαφορετικούς βαθμούς. και καθώς ο διαλύτης ωθεί τις ενώσεις διαμέσου της στήλης, ένα από τα συστατικά του μίγματος εξέρχεται πρώτα από τη στήλη. Το όργανο ανιχνεύει τις ενώσεις καθώς εξέρχονται από τη στήλη και παράγουν ένα χρωματογράφημα που αποτελείται από ένα γράφημα με χρόνο συγκράτησης στον άξονα x και ένταση του σήματος από τον ανιχνευτή στον άξονα y. Καθώς οι ενώσεις εξέρχονται από τη στήλη, παράγουν "κορυφές" στο χρωματογράφημα. Γενικά, όσο πιο μακριά και όσο πιο στενές είναι οι κορυφές στο χρωματογράφημα, τόσο μεγαλύτερη είναι η ανάλυση. Οι επιστήμονες θεωρούν ότι ένα ψήφισμα 1,0 ή μεγαλύτερο αντιπροσωπεύει έναν επαρκή διαχωρισμό.
Μετρήστε τα πλάτη δύο γειτονικών κορυφών στο χρωματογράφημα σημειώνοντας όπου οι τιμές των αξόνων x βρίσκονται στη βάση κάθε κορυφής. Ο άξονας x αντιπροσωπεύει τον χρόνο συγκράτησης, ο οποίος συνήθως μετράται σε δευτερόλεπτα. Έτσι, εάν η κορυφή ξεκινά στα 15,1 δευτερόλεπτα και τελειώνει στα 18,5 δευτερόλεπτα, το πλάτος της είναι (18,5 - 15,1) = 3,4 δευτερόλεπτα.
Προσδιορίστε τους χρόνους κατακράτησης σημειώνοντας το χρόνο, δηλ. Τη θέση στον άξονα x, που αντιστοιχεί στις θέσεις των μεγίστων των κορυφών. Αυτή η τιμή θα είναι κανονικά περίπου στο ήμισυ της διαδρομής μεταξύ των δύο τιμών που χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό του πλάτους στο βήμα 1. Το παράδειγμα που δόθηκε στο βήμα 1, για παράδειγμα, θα έδειχνε ένα μέγιστο σε περίπου 16,8 δευτερόλεπτα.
Υπολογίστε την ανάλυση, R, μεταξύ δύο κορυφών με
R = (RT1-RT2) /,
όπου τα RT1 και RT2 αντιπροσωπεύουν τους χρόνους κατακράτησης των κορυφών 1 και 2 και τα W1 και W2 αντιπροσωπεύουν τα πλάτη των κορυφών που λαμβάνονται στις βάσεις τους. Συνεχίζοντας το παράδειγμα από τα βήματα 2 και 3, μία κορυφή παρουσιάζει χρόνο συγκράτησης 16,8 δευτερολέπτων και πλάτος 3,4 δευτερολέπτων. Εάν η δεύτερη κορυφή παρουσίασε χρόνο συγκράτησης 21,4 δευτερολέπτων με πλάτος 3,6 δευτερολέπτων, τότε θα ήταν η ανάλυση
R = (21,4 - 16,8) / = 4,6 / 3,5 = 1,3.