Περιεχόμενο
- Αραίωση των δειγμάτων, επιμετάλλωση και επώαση
- Μη αυτόματη καταμέτρηση
- Αυτοματοποιημένη μέτρηση
- Κάνοντας την καταμέτρηση πιο περίπλοκη
Ένας από τους κλασικούς τρόπους για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης μικροβίων σε ένα δείγμα είναι η αραίωση του δείγματος, η ανάπτυξη των μικροβίων στις πλάκες και η καταμέτρηση των αποικιών. Τα επιχρισμένα μικρόβια αναπτύσσονται από μια μονάδα σχηματισμού αποικιών που αποτελείται από ένα ή περισσότερα κύτταρα σε μια ορατή αποικία που μπορεί να δει και να μετρηθεί. Τα βακτήρια είναι το πιο συνηθισμένο μικρόβιο για να εκτιμηθεί η χρήση μετρήσεων πλάκας. Οι μετρήσεις αποικιών χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση και τον υπολογισμό μικροβίων στο έδαφος, στο νερό και στα τρόφιμα. Τα πρωτόκολλα για την καταμέτρηση αποικιών τονίζουν μια ακριβή και μεθοδική προσέγγιση.
Αραίωση των δειγμάτων, επιμετάλλωση και επώαση
Εάν απλά κάνετε κηλίδες σε ένα δείγμα μικροβίων σε μια πλάκα άγαρ, θα δείτε τόσες πολλές μονάδες σχηματισμού αποικιών που οι μεμονωμένες αποικίες θα μοιραστούν μαζί, καθιστώντας αδύνατο να μετρήσετε. Για την επίλυση αυτού του προβλήματος, αναμείξτε το δείγμα σε ένα υγρό μέσο, πάρτε μια μικρή ποσότητα αυτού του μείγματος και διαλύστε τον περαιτέρω. Επαναλάβετε αυτή τη διαδικασία έξι έως δέκα φορές. Διαδώστε την τελική αραίωση σε μια πλάκα άγαρ και επωάστε την για τέσσερις έως επτά ημέρες πριν μετρήσετε τις αποικίες.
Μη αυτόματη καταμέτρηση
Το κύριο κόλπο στην καταμέτρηση των αποικιών είναι να μετράτε κάθε μία από τις αποικίες μία φορά. Μια προσέγγιση είναι να ρυθμίσετε το τρυβλίο Petri σε φόντο πλέγματος και να μετρήσετε τις αποικίες σε κάθε κυψελίδα του δικτύου, κινούμενος με ένα μεθοδικό πρότυπο μέσα από όλα τα κελιά. Η σήμανση των αποικιών που βρίσκονται στο πίσω μέρος του πιάτου Petri μπορεί επίσης να είναι μια χρήσιμη προσέγγιση. Γενικά, θα πρέπει να μετρήσετε τουλάχιστον τρεις πλάκες. χρησιμοποιούν μόνο πλάκες που περιέχουν 30 έως 300 αποικίες για να κάνουν ισχυρά συμπεράσματα, προτείνει το Microbiology Network, μια εταιρεία που παρέχει συμβουλευτικές υπηρεσίες σε εργαστήρια και κατασκευαστές. Οι πλάκες με αποικίες που είναι πάρα πολύ πολυάριθμες για να μετρήσουν ή με πολύ λίγες αποικίες χρειάζεται να επανεπικαλυφθούν από μια νέα αραίωση.
Αυτοματοποιημένη μέτρηση
Το ανθρώπινο σφάλμα προσθέτει στον χρόνο που απαιτείται για την καταμέτρηση αποικιών με το χέρι. Για να βελτιωθεί η ακρίβεια και η απόδοση, τοποθετήστε το τρυβλίο Petri σε μια αυτόματη συσκευή καταμέτρησης αποικιών. Αυτοματοποιημένοι μετρητές αποικιών λαμβάνουν μια εικόνα του πιάτου, χωρίζουν τις αποικίες από το φόντο και στη συνέχεια χρησιμοποιούν έναν αλγόριθμο για να μετρήσουν τις αποικίες στην πλάκα. Οι αλγόριθμοι μπορούν να έχουν δυσκολίες στη διαφοροποίηση των αποικιών όταν δύο ή περισσότερες αποικίες αγγίζουν τις άκρες, οπότε πρόκειται για έναν τομέα συνεχούς ανάπτυξης λογισμικού.
Κάνοντας την καταμέτρηση πιο περίπλοκη
Η ακρίβεια του υπολογισμού της πυκνότητας μικροβίων από τον αριθμό των αποικιών έχει κάποιους περιορισμούς. Οι μονάδες που σχηματίζουν αποικίες μπορούν να είναι ένα μόνο κύτταρο, μια αλυσίδα κυττάρων ή μια ολόκληρη δέσμη κυττάρων. Η υπόθεση είναι ότι μια αποικία αντιπροσωπεύει ένα κύτταρο, έτσι οι συγκεντρώσεις που υπολογίζονται από τον αριθμό των αποικιών μπορεί να είναι χαμηλές. Διαφορετικά μικρόβια χρειάζονται διαφορετικές συνθήκες ανάπτυξης και οι αποικίες στην πλάκα αντιπροσωπεύουν μόνο εκείνα τα μικρόβια που ευδοκιμούν σε αυτά τα μέσα ανάπτυξης υπό αυτές τις συνθήκες επώασης. Επιπλέον, η καταμέτρηση των αποικιών δεν καταγράφει τα νεκρά κύτταρα, ένα σημαντικό στοιχείο όταν χρειάζεστε τη συγκέντρωση των κυττάρων στο αρχικό δείγμα.