Περιεχόμενο
- Σειριακές αραιώσεις
- Προετοιμασία πλακών για τον υπολογισμό του τίτλου
- Καταμέτρηση και υπολογισμός του ιού
- Προειδοποιήσεις
Ο υπολογισμός του τίτλου για έναν ιό είναι ένας περίπλοκος τρόπος να λέμε ότι ένας επιστήμονας υπολογίζει τον αριθμό των ιών σε ένα συγκεκριμένο δείγμα. Για να υπολογιστούν οι τίτλοι του ιού, οι επιστήμονες μολύνουν πλάκες αναπτυσσόμενων βακτηρίων με ιικά διαλύματα σε ποικίλες συγκεντρώσεις και υπολογίζουν τον αριθμό των ιών στο αρχικό διάλυμα μετρώντας τα βακτηρίδια που έχουν πεθάνει λόγω της ιογενούς μόλυνσης.
Σειριακές αραιώσεις
Βάλτε τα γάντια, γεμίστε 10 σωλήνες καλλιέργειας με 9 ml ζωμού και επισημάνετε τα "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" και τα λοιπά μέχρι τα "10 ^ -10. θα χρησιμοποιηθεί για ιικές σειριακές αραιώσεις που χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό του τίτλου φάγου. Επειδή οι ιοί μπορούν να αναπτυχθούν σε απίστευτα υψηλές συγκεντρώσεις, πρέπει να τις αραιώσετε για να τις μετρήσετε αποτελεσματικά. Κάθε σωλήνας αντιπροσωπεύει μια δεκαπλάσια αραίωση του ιού.
Πάρτε 1 ml της καλλιέργειας του ιού που θέλετε να υπολογίσετε τον τίτλο του φάγου και μεταφέρετέ τον στον σωλήνα με τίτλο "10 ^ -1" με μια πιπέτα. Αναμίξτε καλά τον σωλήνα. Αυτή είναι η πρώτη δεκαπλάσια αραίωση.
Πάρτε 1 ml της μικτής καλλιέργειας από το σωληνάκι σας με την ένδειξη "10 ^ -1" και μεταφέρετέ το με μια νέα πιπέτα στον επόμενο σωλήνα, με την ένδειξη "10 ^ -2".
Συνεχίστε αυτό το μοτίβο για να δημιουργήσετε σειρά σειριακών αραιώσεων. Θα καταλήξετε με 9 σωλήνες των 9 ml και 1 σωλήνα των 10 ml. Τα ιικά φορτία στους σωλήνες σας θα αραιωθούν οπουδήποτε από 10 φορές (ο πρώτος σωλήνας) ή 100 φορές (ο δεύτερος σωλήνας) σε δέκα δισεκατομμύρια φορές (τον τελικό σωλήνα).
Προετοιμασία πλακών για τον υπολογισμό του τίτλου
Λαμβάνετε 10 σωληνάρια από μαλακό άγαρ τρυπτόνης και 10 πλάκες Petri και επισημάνετε ότι αντιστοιχούν με τους σωλήνες σειριακής αραίωσης.
Χαλαρώστε τα καπάκια έτσι ώστε να μην ξεκολύνουν στη θερμότητα και στη συνέχεια τοποθετήστε τους σωλήνες αγαρόζης σε ένα ποτήρι βραστό νερό. Αυτό θα λιώσει το άγαρ, έτσι ώστε να μπορείτε να το ρίξετε σε πλάκες Petri.
Μεταφέρετε τους σωλήνες σας σε λουτρό ζεστού νερού που έχει ρυθμιστεί σε τουλάχιστον 45 βαθμούς Κελσίου. Αυτό θα διασφαλίσει ότι το άγαρ σας δεν στερεοποιείται στα σωληνάρια πριν να έχετε την ευκαιρία να το ρίξετε σε ένα πιάτο Petri.
Προσθέστε δύο σταγόνες βακτηριακής καλλιέργειας στο άγαρ σας και ανακατέψτε το απαλά. Αυτά είναι τα βακτηρίδια που θα σκοτωθούν, επιτρέποντάς σας να μετρήσετε τον αριθμό των σωματιδίων του ιού σε μια συγκεκριμένη λύση.
Προσθέστε 1 ml από κάθε σειριακή αραίωση στον αντίστοιχο σωλήνα άγαρ ενώ οι σωλήνες βρίσκονται ακόμα στο λουτρό ζεστού νερού. Για παράδειγμα, 1 ml της σειριακής αραίωσης 10 ^ -1 πρέπει να εισέλθει στον σωλήνα άγαρ με την ένδειξη "10 ^ -1".
Αναμίξτε κάθε σωλήνα και στη συνέχεια ρίξτε κάθε σωλήνα στην πλάκα Petri με την αντίστοιχη ετικέτα. Αυτό θα δημιουργήσει ένα λεπτό στρώμα άγαρ που έχει εμβολιασθεί με βακτήρια και ιούς σε κάθε πλάκα. Αφήστε τα πλακίδια να αναπτυχθούν κατά τη διάρκεια της νύχτας σε έναν επωαστήρα.
Καταμέτρηση και υπολογισμός του ιού
Αφαιρέστε τα πιάτα σας από το φυτώριο και τα εξετάστε. Θα πρέπει να βλέπετε θολές περιοχές σε όλη την πλάκα όπου έχουν αναπτυχθεί βακτήρια, εκτός από μικρές διαυγές κηλίδες που ονομάζονται πλάκες. Αυτές οι πλάκες είναι μπαλώματα νεκρών βακτηρίων και κάθε πλάκα αντιπροσωπεύει έναν ιό.
Βρείτε μια πλάκα που έχει μεταξύ 30 και 300 πλάκες και μετρήστε τον ακριβή αριθμό των πλακών σε αυτήν την πλάκα.
Πάρτε τον αριθμό των πλακών στην πλάκα σας και πολλαπλασιάστε με 10. Εάν υπολογίζατε 157 πλάκες, θα λάβετε 1570.
Πολλαπλασιάστε τον αριθμό που πήρατε στο προηγούμενο βήμα από το αντίστροφο του αριθμού στο σωλήνα αραίωσης. Για παράδειγμα, εάν η πλάκα που επιλέξατε ήταν η πλάκα 10 ^ -5, θα πολλαπλασιάσατε 1570 με 10 ^ 5 για να πάρετε 157000000. Αυτός ο τελικός αριθμός είναι ο τίτλος φάγων σας και αντιπροσωπεύει τον αριθμό των ιών ανά ml της αρχικής σας κουλτούρας.