Περιεχόμενο
Η χρώση Gram είναι μια διαδικασία διαφορικής χρώσης που δείχνει ποια βακτήρια είναι Gram-θετικά ή Gram-αρνητικά με βάση το χρώμα των λεκέδων τους. Η ακετόνη αλκοόλη είναι ένα αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται σε αυτή τη διαδικασία για την παροχή της διαφοροποίησης των χρωμάτων. Τα θετικά κατά Gram βακτήρια έχουν ένα πυκνό στρώμα πεπτιδογλυκάνης και το χρώμα τους είναι μοβ, ενώ οι αρνητικοί κατά Gram μικροοργανισμοί έχουν λίγο έως καθόλου στρώμα πεπτιδογλυκάνης και ροζ χρώση.
Πρωτοταγής κηλίδα-κρύσταλλο βιολετί
Μόλις παρασκευαστεί μια διαφάνεια βακτηριακού δείγματος, χρησιμοποιείται κρυσταλλικό ιώδες για την πρώτη χρώση του δείγματος. Σε αυτό το σημείο και τα Gram-θετικά και Gram-αρνητικά βακτήρια θα εμφανιστούν μοβ. Συνήθως το κρύσταλλο ιώδες εφαρμόζεται επί της ολίσθησης για 30 δευτερόλεπτα πριν από το ξέπλυμα οποιασδήποτε περίσσειας λεκέ με νερό. Το κρυσταλλικό ιώδες μπορεί να προσκολληθεί λίγο στα στρώματα πεπτιδογλυκάνης έτσι ώστε να μην εκπλυθεί ολόκληρο ο πρωταρχικός λεκέ με το νερό.
Μορντάν-Ιώδιο
Στη συνέχεια προστίθεται ιώδιο στο δείγμα για ένα λεπτό. Λειτουργεί ως ιγμορίτης, ο οποίος χρησιμεύει για τη σταθεροποίηση χρωμάτων σε μια διαδικασία χρώσης. Το ιώδιο εκτελεί αυτή τη λειτουργία δεσμεύοντας το κρυσταλλικό ιώδες και δημιουργώντας ένα αδιάλυτο σύμπλοκο που προσκολλάται πολύ καλύτερα στο παχύ στρώμα πεπτιδογλυκάνης που βρίσκεται στα Gram θετικά βακτηριακά κύτταρα απ 'ό, τι μόνο στο κρυσταλλικό ιώδες μόνο του. Δεν υπάρχει βήμα πλύσης με νερό μετά την προσθήκη του ιωδίου.
Αποχρωματιστής-Αλκοόλ
Μπορεί να χρησιμοποιηθεί είτε ακετόνη είτε αιθυλική αλκοόλη ως παράγοντας αποχρωματισμού. Η αλκοόλη διαλύει λιπίδια που βρίσκονται στην εξωτερική κυτταρική μεμβράνη Gram-αρνητικών βακτηριδίων, επιτρέποντας στο σύμπλοκο κρυσταλλικού ιώδους-ιωδίου να διαρρεύσει από το λεπτότερο στρώμα πεπτιδογλυκάνης. Η αλκοόλη προστίθεται για 10 έως 20 δευτερόλεπτα. χύνεται επί της ολίσθησης μέχρι να εκπλυθεί όλο το ιώδιο και η απορροή είναι άχρωμη. Σε αυτό το σημείο στη διαδικασία βαφής Gram, τα Gram-αρνητικά βακτηρίδια είναι άχρωμα ενώ Gram-θετικά βακτηρίδια εξακολουθούν να διατηρούν το κρυσταλλικό ιώδες. Μόλις τελειώσει η ολίσθηση πρέπει να ξεπλυθεί με νερό για να σταματήσει το φαινόμενο αποχρωματισμού.
Αντίστροφη-Σαφρανίνη
Στη συνέχεια προστίθεται σαφρανίνη για να αυξηθεί η ορατότητα και η αντίθεση με τα άχρωμα Gram-αρνητικά βακτηρίδια. Η κηλίδα κάνει αυτά τα βακτήρια να εμφανίζονται ροζ κάτω από το μικροσκόπιο. Δεδομένου ότι η κηλίδα προστίθεται σε ολόκληρο το δείγμα, κηλιδώνει επίσης θετικά κατά Gram βακτήρια, αλλά το πιο σκοτεινό από το κρυσταλλικό ιώδες κρύβει το πιο ανοιχτό ροζ χρώμα σαφράνης. Μόλις το δείγμα διαφανειών πλημμυρίσει με σαφρανίνη για περίπου ένα λεπτό, χρησιμοποιείται νερό για την απόπλυση οποιουδήποτε υπερβολικού χρώματος που δεν προσκολλάται στα βακτηριακά κύτταρα.