Περιεχόμενο
Οι επιστήμονες χρησιμοποιούν σειριακές αραιώσεις (σειρά 1:10 αραιώσεων) για τον υπολογισμό της πυκνότητας πληθυσμού βακτηριακών καλλιεργειών. Όταν μια σταγόνα καλλιέργειας που περιέχει μικρό αριθμό βακτηρίων επιχρίεται και επωάζεται, κάθε κύτταρο θεωρητικά θα είναι αρκετά μακριά από άλλα κύτταρα που θα σχηματίσει τη δική του αποικία. (Στην πραγματικότητα, μερικές αποικίες μπορεί να είναι απόγονοι δύο κοντινών κυττάρων, αλλά αυτό είναι σπάνιο σε αραιές καλλιέργειες και έτσι ο αριθμός των αποικιών είναι πολύ καλή εκτίμηση του αριθμού των κυττάρων που αρχικά μεταφέρθηκαν στην πλάκα.) Επειδή η πυκνότητα του πληθυσμού είναι άγνωστο, πρέπει να χρησιμοποιηθεί μια ποικιλία αραιώσεων για να καταλήξουμε σε μία πλάκα με κατάλληλο αριθμό αποικιών.
Σειριακές αραιώσεις
Σημειώστε τα έξι δοκιμαστικά σωληνάρια (το καθένα από τα οποία περιέχει 9 mL μέσου ανάπτυξης) ως 1 έως 6. Επισημάνετε τις έξι πλάκες άγαρ ως 1 έως 6. Χρησιμοποιήστε ένα πιπέτα και αποστειρωμένες άκρες σιφωνίου 1 ml (ml) για να μεταφέρετε 1 mL βακτηριακής καλλιέργειας σε σωληνάριο 1.
Αναμείξτε καλά και μεταφέρετε 1 mL από το σωλήνα 1 στον σωλήνα 2 χρησιμοποιώντας ένα πιπέτα και αποστειρωμένα άκρα 1 mL.
Επαναλάβετε το Βήμα 2 για τους υπόλοιπους σωλήνες, κάθε φορά που μεταφέρετε 1 mL από τον πιό πρόσφατα χρησιμοποιούμενο σωλήνα στον επόμενο σωλήνα.
Χρησιμοποιήστε ένα πιπέτα και αποστειρωμένα άκρα των 0,1 mL για να μεταφέρετε 0,1 mL από το σωλήνα 1 σε μια πλάκα άγαρ. Πιάστε μια γυάλινη ράβδο σε σχήμα L και χρησιμοποιήστε την για να διασκορπίσετε την πτώση ομοιόμορφα γύρω από την πλάκα. Επωάστε την πλάκα για 48 ώρες σε κατάλληλη θερμοκρασία για τη χρήση των βακτηρίων. Διαφορετικοί τύποι βακτηριδίων έχουν διαφορετικές βέλτιστες θερμοκρασίες ανάπτυξης. Εάν δεν μπορείτε να βρείτε τη βέλτιστη θερμοκρασία ανάπτυξης χρησιμοποιώντας υλικό αναφοράς, δοκιμάστε να επωαστούν οι πλάκες σε 25 και 37 μοίρες.
Επαναλάβετε το Βήμα 4, κάθε φορά που μεταφέρετε υγρό από διαφορετικό δοκιμαστικό σωλήνα στην αντίστοιχη του πλάκα.
Υπολογισμοί πληθυσμού
Παρατηρήστε τις έξι πλάκες και επιλέξτε το με 30 έως 200 απομονωμένες αποικίες.
Πολλαπλασιάστε τον αριθμό των αποικιών στην πλάκα με 10 για να υπολογίσετε τον αριθμό κυττάρων ανά mL καλλιέργειας από το χρησιμοποιούμενο σωλήνα αραίωσης.
Πολλαπλασιάστε τον αριθμό από το Βήμα 2 κατά 10 ^ (αριθμός πλάκας) για να υπολογίσετε τον αριθμό κυττάρων ανά mL της αρχικής καλλιέργειας. Η τιμή του 10 ^ (αριθμός πλάκας) είναι ο συντελεστής αραίωσης της καλλιέργειας που χρησιμοποιείται για να εμβολιάσει αυτή την πλάκα.