Περιεχόμενο
Τα βακτήρια αναπτύσσονται σε τρυβλία Petri επί στερεού μέσου γνωστού ως βακτηριακού άγαρ, όπου σχηματίζονται ανυψωμένες κυκλικές αποικίες. Σε αντίθεση με ένα μεμονωμένο βακτηριακό κύτταρο, μια αποικία είναι μια ομάδα βακτηρίων αρκετά μεγάλα ώστε να είναι ορατά με γυμνό μάτι. Η βακτηριακή ανάπτυξη μπορεί να μετρηθεί με απλή παρατήρηση του αριθμού των αποικιών που υπάρχουν. Ωστόσο, πιο ποσοτικές μέθοδοι περιλαμβάνουν τη χρήση ενός θαλάμου καταμέτρησης, ή πιο συχνά, βιώσιμων μετρήσεων πλακών. Το τελευταίο χρησιμοποιείται συχνότερα καθώς παρέχει επίσης ποιοτικές πληροφορίες, όπως το αποτέλεσμα ποικίλων συνθηκών ανάπτυξης. Δεδομένου ότι μπορεί να υπάρχουν δισεκατομμύρια βακτήρια σε ένα τρυβλίο Petri, η μέτρηση πρώτα απαιτεί την αραίωση του δείγματος έτσι ώστε να είναι δυνατή η μέτρηση του αριθμού των αποικιών.
Σε δοκιμαστικό σωλήνα προσθέστε 10 μικρολίτρα της αρχικής βακτηριακής καλλιέργειας σε 90 μικρολίτρα μέσου αραίωσης. Κλείστε το καπάκι του σωλήνα σφιχτά και στροβιλίστε απαλά για να αποκτήσετε ένα ομοιογενές μίγμα. Τώρα το δείγμα είναι ένα δέκατο της αρχικής συγκέντρωσης.
Μεταφέρετε 10 μικρολίτρα αυτού του νέου δείγματος σε νέο δοκιμαστικό σωλήνα που περιέχει 90 μικρολίτρα μέσου αραίωσης, αναμίξτε το ξανά. Για άλλη μια φορά, το αποτέλεσμα θα είναι το δείγμα περαιτέρω αραιωμένο - τώρα θα είναι το ένα εκατοστό της αρχικής του συγκέντρωσης. Επαναλάβετε αυτό αρκετές φορές, μέχρι να αραιωθεί το αρχικό δείγμα μεταξύ 104 και 1010 φορές. Βεβαιωθείτε ότι κάθε σωλήνας είναι εφοδιασμένος με τη σωστή αραίωση, για παράδειγμα 10-1, 10-2 και ούτω καθεξής.
Διανείμετε 10 μικρολίτρα της τελευταίας αραίωσης που ολοκληρώθηκε στην πλάκα άγαρ. Χρησιμοποιώντας το άκρο εξάπλωσης, διανείμετε το βακτηριακό διάλυμα σε όλη την επιφάνεια της πλάκας άγαρ. Επαναλάβετε αυτό για δύο ακόμη πλάκες. Είναι επίσης κοινό να πραγματοποιούνται αυτά τα βήματα με άλλα επίπεδα αραίωσης για σύγκριση. Φροντίστε να επισημάνετε τους πυθμένες των πινακίδων. Αντικαταστήστε τα καπάκια σε κάθε πλάκα και αφήστε τα τρυβλία άγαρ να στεγνώσουν για αρκετά λεπτά είτε σε εργαστηριακό πάγκο κάτω από φλόγα είτε σε θερμοκοιτίδα. Τοποθετήστε τις πλάκες στον επωαστήρα, ο οποίος θα πρέπει να ρυθμιστεί στην κατάλληλη θερμοκρασία για το στέλεχος των βακτηρίων. Αφήστε να αναπτυχθεί για 12 έως 16 ώρες.
Οι αποικίες πρέπει να είναι ορατές μετά από 16 ώρες. Ωστόσο, ορισμένες γενετικές τροποποιήσεις ενδέχεται να απαιτούν μεγαλύτερη διάρκεια (για παράδειγμα, ανάπτυξη χρώματος). Όταν οι αποικίες είναι παρατηρήσιμες, πάρτε τα πιάτα έξω και βρείτε αυτά που έχουν μεταξύ 30 και 300 αποικίες. Χρησιμοποιώντας ένα μόνιμο δείκτη, τοποθετήστε μια κουκίδα στο κάτω μέρος του τρυβλίου Petri - την πλευρά με το άγαρ και όχι το καπάκι - οπουδήποτε είναι εμφανής μια αποικία μέσα από το άγαρ. Μετρήστε κάθε κουκίδα δείκτη. Επαναλάβετε για κάθε πιάτο.
Για να μετρηθεί η ποσότητα βακτηρίων στην αρχική καλλιέργεια για αυτό το πείραμα, η αραίωση πρέπει να αναστραφεί στους υπολογισμούς, σε δύο μέρη. Πρώτον, όταν πήρατε ένα μικρολίτρο από το δοκιμαστικό σωλήνα για να τοποθετήσετε το τρυβλίο Petri, πήρατε το ένα δέκατο του αραιωμένου δείγματος, οπότε πρέπει να πολλαπλασιάσετε τα πάντα κατά 10 για να το αντιστρέψετε. Επιπλέον, εάν ο συντελεστής αραίωσης στον δοκιμαστικό σωλήνα ήταν, για παράδειγμα, 10-7 , τότε ο αριθμός των αποικιών πρέπει να πολλαπλασιαστεί επί 107 προκειμένου να αντιστραφεί το αποτέλεσμα αραίωσης. Απλώς αφαιρέστε το αρνητικό σύμβολο από τον εκθέτη στους υπολογισμούς. Χρησιμοποιήστε τον τύπο:
× 10 × = Αριθμός μονάδων που σχηματίζουν αποικίες (CFU) ανά χιλιοστόλιτρο αρχικής καλλιέργειας. Αυτή είναι η βακτηριακή ανάπτυξη στα πιάτα Petri.