Περιεχόμενο
Βιοχημικά μελετούν μόρια όπως DNA, RNA και πρωτεΐνες. Οι τεχνικές στυψίματος είναι αυτές που χρησιμοποιούν οι επιστήμονες για να διαχωρίσουν αυτούς τους τύπους μορίων. Στα κύτταρα, υπάρχουν ως μείγμα. Το στύπωμα επιτρέπει στους ερευνητές να βρουν μία πρωτεΐνη μεταξύ πολλών, όπως μια βελόνα σε μια θηλή. Η κηλίδωση γενικά πραγματοποιείται με την αποδέσμευση μίγματος ϋΝΑ, RNA ή πρωτεΐνης διαμέσου μιας πλάκας πηκτής. Αυτό το πήκτωμα επιτρέπει στα μικρά μόρια να κινούνται ταχύτερα από τα μεγαλύτερα. Τα διαχωρισμένα μόρια στη συνέχεια πιέζονται πάνω σε μια μεμβράνη, η οποία βοηθάει να μετακινηθούν τα μόρια από το πήκτωμα πάνω στη μεμβράνη. Τα μόρια κολλούν στη μεμβράνη, αλλά παραμένουν στην ίδια θέση, εκτός από το ένα το άλλο, σαν να ήταν ακόμα στο τζελ.
Western Blot
Το στύπωμα Western είναι μια κοινή τεχνική για τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών κατά μέγεθος, αλλά σε ευθείες στήλες. Αυτές οι παράλληλες στήλες επιτρέπουν στους ερευνητές να συγκρίνουν την ποσότητα μιας πρωτεΐνης σε διαφορετικά δείγματα που τρέχουν δίπλα στην άλλη, όπως λωρίδες μπόουλινγκ. Για παράδειγμα, εάν δοκιμάσατε την επίδραση διαφόρων ποσοτήτων ενός φαρμάκου στην κυτταρική ανάπτυξη, θα αντιμετωπίζατε τέσσερις διαφορετικές ομάδες κυττάρων με διαφορετική ποσότητα φαρμάκου. Τότε θα μπορούσατε να σπάσετε τα κύτταρα ανοιχτά και να τρέξετε τις πρωτεΐνες της κάθε ομάδας σε ξεχωριστές λωρίδες πάνω σε μια γέλη. Η διάδοση των πρωτεϊνών με αυτόν τον τρόπο σας επιτρέπει να δείτε τι κάνει μια αυξανόμενη συγκέντρωση φαρμάκων σε μια συγκεκριμένη πρωτεΐνη.
Northern Blot
Το στύπωμα Northern χρησιμοποιείται για την ανίχνευση του RNA. Τα κύτταρα μπορούν να σπάσουν ανοιχτά για να απελευθερώσουν το RNA τους. Το RNA από διαφορετικούς κυτταρικούς τύπους μπορεί να εκτελεστεί σε ξεχωριστές λωρίδες σε ένα πήκτωμα. Το πήκτωμα απλώνει το διαφορετικό RNA κατά μέγεθος. Αυτές οι τακτικές, παράλληλες σειρές RNA επιτρέπουν σε έναν ερευνητή να συγκρίνει ποιος τύπος κυττάρου έχει πόση ποσότητα RNA. Αυτή η μέθοδος επιτρέπει σε έναν ερευνητή να προσδιορίσει εάν κύτταρα από κάποια ασθένεια έχουν περισσότερο από αυτό το RNA ή λιγότερο από αυτό το RNA. Το στύπωμα Northern μπορεί να αποκαλύψει τον τρόπο με τον οποίο λειτουργεί μια ασθένεια στο επίπεδο της παραγωγής RNA.
Southern Blot
Το στύπωμα Southern είναι η αρχική τεχνική στύπωσης, η οποία ξεκίνησε το σύστημα ονομασίας. Εχει εφευρεθεί από τον Edwin Southern. Το στύπωμα Southern χρησιμοποιείται για την ανίχνευση της ποσότητας του DNA σε ένα μείγμα. Όπως και με την πρωτεΐνη και το RNA, το DNA ενός κυττάρου μπορεί να απελευθερωθεί όταν αυτό το κύτταρο σπάσει ανοιχτό. Η κηλίδωση Southern διαχωρίζει το DNA από διαφορετικούς τύπους κυττάρων κατά μέγεθος. Το DNA από κάθε δείγμα απλώνεται σε καθαρές, παράλληλες λωρίδες. Μεμονωμένα κομμάτια του DNA μπορούν να ανιχνευθούν χρησιμοποιώντας έναν ραδιενεργό ή φθορίζοντα ανιχνευτή, ο οποίος έχει σχεδιαστεί για να δεσμεύεται μόνο σε εκείνο το κομμάτι DNA. Το ενεργειακό σήμα από έναν ραδιενεργό ανιχνευτή ή οι λάμψεις φωτός από ένα σήμα φθορισμού, λένε στους ερευνητές πόσο από το κομμάτι του DNA υπάρχει σε κάθε δείγμα.
Άλλα στυπώματα
Οι τρεις βασικές τεχνικές στύπωσης - Δυτική, Βόρεια και Νότια - έχουν τροποποιηθεί με διάφορους τρόπους για την ανίχνευση ελαφρώς διαφορετικών μορίων. Το Western blot εναντίον του Southern blot, για παράδειγμα. ανιχνεύει πρωτεΐνη και DNA, αντίστοιχα. Κάθε τροποποιημένη τεχνική γίνεται γενικά με τον συνήθη τρόπο, αλλά χρησιμοποιεί μια διαφορετική μέθοδο για την ανίχνευση του μορίου που απλώνεται στις παράλληλες λωρίδες. Οι κηλίδες Southwestern ανιχνεύουν μόρια πρωτεΐνης κολλημένα στο DNA. Οι κηλίδες Northwestern ανιχνεύουν μόρια πρωτεΐνης κολλημένα στο RNA. Τα αποτυπώματα Farwestern ανιχνεύουν μόρια πρωτεΐνης κολλημένα σε άλλες πρωτεΐνες.