Περιεχόμενο
Το Escherichia coli, Ε. Coli, είναι ένα βακτήριο που αναπτύσσεται στα κατώτερα έντερα των θηλαστικών. Αυτά τα βακτήρια ανακαλύφθηκαν για πρώτη φορά στα τέλη του 1800. Έκτοτε, έχει μακρά ιστορία χρήσης στην επιστημονική έρευνα. Είναι ο πιο ευρέως χρησιμοποιούμενος οργανισμός στη μοριακή γενετική. Μέρος του λόγου για τον οποίο η E. coli χρησιμοποιείται συνήθως στην επιστημονική έρευνα είναι ότι είναι εύκολο να αναπτυχθεί σε εργαστήριο. Οι παράγοντες που καθιστούν το E. coli εύκολο να αναπτυχθούν είναι οι απλές διατροφικές του ανάγκες, ο ταχύς ρυθμός ανάπτυξης και οι μέτριες απαιτήσεις συντήρησης.
Αποστειρώστε τον βρόγχο εμβολιασμού τοποθετώντας το στη φλόγα του καυστήρα Bunsen. Περάστε το κάτω μισό του βρόχου μέσω της φλόγας μέχρι να ανάψει κόκκινο.
Αφήστε τον βρόχο να κρυώσει. Μπορείτε να το αγγίξετε στο αποστειρωμένο άγαρ στην πλάκα για να βεβαιωθείτε ότι έχει κρυώσει. Μην τοποθετείτε τον βρόχο στο τραπέζι ή αφήστε τον να έρθει σε επαφή με οτιδήποτε άλλο εκτός από το στείρο άγαρ ή την επιθυμητή καλλιέργεια τώρα που έχει αποστειρωθεί.
Βυθίστε το βρόχο στην καλλιέργεια του Ε. Coli και, στη συνέχεια, αφαιρέστε το.
Ανοίξτε την πλάκα άγαρ και γλιστρήστε απαλά τον βρόχο εμπρός και πίσω στην επιφάνεια ενός τμήματος του άγαρ. Προσέξτε να μην γρατσουνίζετε το άγαρ με το βρόχο. Το άγαρ παρέχει τα θρεπτικά συστατικά που χρειάζεται η E. coli να αναπτυχθεί.
Τοποθετήστε τον βρόχο στη φλόγα του καυστήρα Bunsen και πάλι για να τον αποστειρώσετε. Μόλις κρυώσει η ράβδος βρόχου, αγγίξτε την σε ένα αποστειρωμένο τμήμα της πλάκας για να βεβαιωθείτε ότι είναι δροσερό, στη συνέχεια γλιστρήστε το βρόχο μέσα από την πρώτη σειρά για να κάνετε μια δεύτερη σειρά. Αυτή η δεύτερη σειρά είναι μια αραιή έκδοση της πρώτης σειράς. Επαναλάβετε αυτή τη διαδικασία αποστείρωσης και ολίσθησης μέχρι να γλιστρήσει αρκετές τομές της πλάκας άγαρ. Ο λόγος για τον οποίο κάνετε αυτό είναι να μπορείτε αργότερα να επιλέξετε από μεμονωμένες, κλωνικές αποικίες. Αυτό θα σας βοηθήσει να βεβαιωθείτε ότι έχετε τουλάχιστον μια ενότητα που έχει μεμονωμένες αποικίες - όχι πολύ συγκεντρωμένη (η οποία θα έχει υπερβολική ανάπτυξη και δεν θα σας επιτρέψει να επιλέξετε από μια αποικία) και όχι πολύ αραιά (που δεν θα έδιναν αποικίες) .
Αποστειρώστε τον βρόχο στη φλόγα για τελευταία φορά πριν το βγάλετε στην επιφάνεια εργασίας.
Βάλτε την κορυφή πίσω στην πλάκα άγαρ. Γυρίστε την πλάκα ανάποδα και τοποθετήστε την στο επωαστήριο ρυθμισμένο στους 37 βαθμούς Κελσίου (98,6 βαθμούς Φαρενάιτ). Αυτή η ιδανική θερμοκρασία επώασης προσομοιώνει τη θερμοκρασία του ανθρώπινου σώματος όπου κατοικεί το Ε. Coli. Εντός 24 έως 48 ωρών, εμφανίζονται ορατές αποικίες βακτηρίων Ε. Coli στην πλάκα άγαρ.