Περιεχόμενο
Η απομόνωση των βακτηρίων από το έδαφος είναι ένα σημαντικό πρώτο βήμα σε πολλά πειράματα μικροβιολογίας. Μόλις απομονωθούν, τα βακτήρια μπορούν να αναλυθούν περαιτέρω για να προσδιοριστούν τα πράγματα, όπως το είδος τους και η λειτουργία τους στο περιβάλλον του εδάφους. Ακόμη και μια μικρή ποσότητα εδάφους μπορεί να περιέχει εκατομμύρια βακτήρια, πράγμα που καθιστά αναγκαία την αραίωση ενός δείγματος εδάφους πριν την απομόνωση των βακτηρίων από το δείγμα.
Μετρήστε 100 ml. απεσταγμένο νερό στον βαθμονομημένο κύλινδρο και προσθέστε το στο αποστειρωμένο μπουκάλι.
Ζυγίζεται 1 g του δείγματος εδάφους και προστίθεται στη φιάλη αποσταγμένου νερού.Κλείστε καλά τη φιάλη και ανακινήστε το για να αναμίξετε καλά το διάλυμα.
Επισημάνετε τους αποστειρωμένους δοκιμαστικούς σωλήνες "10 ^ -3," "10 ^ -4," "10 ^ -5," και "10 ^ -6". Προσθέστε 9 ml αποσταγμένου νερού σε κάθε σωλήνα, χρησιμοποιώντας μία από τις πιπέτες.
Μεταφέρετε 1 ml του διαλύματος στη φιάλη στον σωλήνα με την ένδειξη "10 ^ -3", χρησιμοποιώντας μια νέα πιπέτα. Κλείστε το σωλήνα και στροβιλίστε απαλά μέχρι να αναμιχθεί καλά το διάλυμα.
Μεταφέρετε 1 ml του διαλύματος στον δοκιμαστικό σωλήνα "10 ^ -3" στον σωλήνα "10 ^ -4" με νέα πιπέτα. Κλείστε το σωλήνα "10 ^ -4" και στροβιλίστε για να αναμίξετε. Επαναλάβετε αυτή τη μέθοδο για να μεταφέρετε το διάλυμα από το σωλήνα "10 ^ -4" στον σωλήνα "10 ^ -5" και στη συνέχεια από τον σωλήνα "10 ^ -5" στον σωλήνα "10 ^ -6".
Πιάστε τρία δείγματα το καθένα από τους σωλήνες "10 ^ -4," "10 ^ -5" και "10 ^ -6". Χρησιμοποιήστε μια νέα πιπέτα για να μεταφέρετε 1 ml διαλύματος από το σωλήνα σε πλάκα Petri. Προσθέστε περίπου 15 ml θρεπτικού άγαρ στην πλάκα. στη συνέχεια τοποθετήστε το καπάκι στην πλάκα και στροβιλίστε απαλά ώστε το άγαρ να καλύπτει το κάτω μέρος της πλάκας.
Κάνετε μια πλάκα ελέγχου τοποθετώντας 1 ml αποσταγμένου νερού σε μια πλάκα Petri, χρησιμοποιώντας μια νέα πιπέτα. Προσθέστε άγαρ. βάλτε το καπάκι και στροβιλίστε την πλάκα.
Αφήστε τα πλακίδια Petri σε όρθια θέση μέχρι να ρυθμιστεί το άγαρ. Στη συνέχεια, αναστρέψτε τις πλάκες και επωάστε τις - είτε σε θερμοκήπιο είτε σε θερμοκρασία δωματίου - για μόλις 24 ώρες και μέχρι πέντε ημέρες.
Αφαιρέστε τις πλάκες από τον επωαστήρα μετά από την επιθυμητή ποσότητα χρόνου επώασης. Μετρώνται οι βακτηριακές αποικίες σε πλάκες που περιέχουν περίπου 30 έως 300 αποικίες. Χρησιμοποιήστε έναν μόνιμο δείκτη για να επισημάνετε τις αποικίες που έχετε ήδη μετρήσει για να αποφύγετε την καταμέτρηση των ίδιων αποικιών δύο φορές.
Διαχωρίστε τον αριθμό των αποικιών που μετρήθηκαν από την αραίωση - "10 ^ -4," "10 ^ -5" ή "10 ^ -6" του διαλύματος εδάφους για κάθε πλάκα. Βρείτε τον αριθμό των καλλιεργούμενων βακτηρίων στο αρχικό γραμμάριο του εδάφους με τη μέτρηση των αποτελεσμάτων από κάθε μετρήσιμη πλάκα.